Jean Dujardin, après avoir débuté dans la vie active en tant que serrurier, voit ses talents de comique se révéler à l'armée. Il monte à Paris et se produit dans des bars. Il rencontre au Carré Blanc Éric Collado, Emmanuel Joucla, Éric Massot et Bruno Salomone, avec qui il forme la Bande du Carré Blanc, devenant plus tard les Nous C Nous. Ce groupe de comiques est alors révélé par l'émission Graines de star sur M6 en 1997. La bande remporte le programme à trois reprises dans la catégorie "comiques". Par la suite, il tourne avec Bruno Salomone, son grand ami de petits sketches pour l'émission Farce Attaque, sur France 2.
D'octobre 1999 à juin 2003, il joue avec Alexandra Lamy dans la série télévisée à succès Un gars, une fille sur France 2. Les deux interprètes des personnages, nommés comme eux Jean et Alexandra, alias Chouchou (elle) et Loulou (lui), sont devenus un couple à la vie comme à la scène.
Son premier grand succès au cinéma est le film Mariages ! de Valérie Guignabodet en 2004. Brice de Nice, l'adaptation au cinéma du personnage d'un de ses sketchs avec les Nous C Nous, sorti en 2005, est un succès au box-office et devient très populaire dans les cours d'école où la fameuse expression J't'ai cassé devient à la mode. Il obtient une nomination au César du meilleur acteur en 2007 suite à sa prestation dans le film OSS 117 : Le Caire, nid d'espions. La suite, OSS 117 : Rio ne répond plus, est sortie en avril 2009.
Acteur touchant à tous les registres, il tourne un rôle à contre-emploi dans Contre-enquête et 99 francs où il interprète le rôle d'un publicitaire désabusé et dépressif dans l'adaptation du livre de Frédéric Beigbeder, 99 F. Il sélectionne ses rôles, refusant entre autres, le rôle principal de Bienvenue chez les ch'tis. A la suite du succès de celui-ci, il décide d'ailleurs de se séparer de son agent, ce dernier lui ayant préféré Cash, un échec au box-office. En 2008, il joue aux côtés de Jean-Paul Belmondo auquel il est souvent comparé dans Un homme et son chien de Francis Huster.
Il est l'un des acteurs français les mieux payés d'après le Figaro :
Ses revenus en 2005 sont estimés à 1 610 000 Euros, ce qui fait de lui le 4e acteur français le mieux payé.
Ses revenus en 2006 sont estimés à 2 700 000 Euros, ce qui fait de lui le 3e acteur français le mieux payé.
Ses revenus en 2007 sont estimés à 1 700 000 Euros, ce qui fait de lui le 5e acteur français le mieux payé.
Ses revenus en 2008 sont estimés à 1 350 000 Euros, ce qui fait de lui le 8e acteur français le mieux payé.
En 2007, il devient producteur et réalisateur avec la série de programmes courts Palizzi proposée sur la chaîne 13ème rue avec dans le rôle principal Arsène Mosca. Devant le succès de la série, un film adapté du pilote de la série va être tourné.
